ningxueqin 发表于 2024-2-24 17:21:02

抗体CMC关于菌种的运输、储存与复苏!

  问:生物提供一系列常用菌种,那么,抗体CMC菌种以什么形态提供给客户更好呢?
  答:一般菌种保存形态是甘油菌。但甘油保存菌容易污染,运输也不方便,因此,我们在给客户寄送菌种时,提倡寄送穿刺培养菌。因为穿刺菌在4℃下可保存数个月,并且不容易污染,便于运送。(注:夏天运输时一定要用冰盒冰袋)
  问:如何制作穿刺菌?
  答:制作穿刺菌时,可在1.5ml的Tube管中加入琼脂培养基(半固体),把菌体用牙签穿刺于琼脂培养基中,37℃ 培养一个晚上后便可使用。
  问:客户收到穿刺菌后该如何储存?
  答:如短期保存(1个月内),可直接置于4℃保存;如长期保存,建议从穿刺菌划线后,挑取单菌落,接种在液体培养基中,做成甘油菌,置于-80℃保存。如需备份,也需要重新制备甘油菌,-80℃保存。
  问:如何做甘油菌?
  从菌种平板挑取单菌落,接种至液体培养基(按需要加入抗生素)中,培养过夜或培养至对数中期,取适量菌液于小管中,加入终浓度为10%-20%的灭菌甘油,混匀后可直接置于-80℃保存。
  问:如何从穿刺菌中复苏细菌?
  答:穿刺菌来源于单菌落,建议客户收到穿刺菌后,请先在LB平板上划线,然后挑取一个新鲜的单菌落于LB液体培养基中进行培养即可。
  具体操作如下:取一个干净的移液器枪头,沿着穿刺管中淡黄色的大肠杆菌生长线插入,来回反复操作几次,每次都轻微改变枪头的方向,以尽可能的增加枪头与菌的接触面。将沾了菌的枪头在的LB平板上划线。将平板置于37℃培养箱中过夜培养。次日从LB平板上挑取一个单菌落接种到LB液体培养基中,37℃摇床过夜培养。
  注:如果是含有载体的穿刺菌,则需用含有相应抗生素(载体的抗性基因)的LB平板和液体培养基,复苏菌种后直接提质粒即可。
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